GPIの導入

May 18, 2023

Scientific Reports volume 5、記事番号: 11856 (2015) この記事を引用

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2 オルトメトリック

メトリクスの詳細

HIV ワクチンは、感染を阻止するための粘膜侵入口と、播種されたウイルスを除去するための全身区画の両方で免疫応答を誘発する必要があります。 非複製ワクチンによる効果的な粘膜免疫を誘導するには、粘膜アジュバントの同時送達が不可欠であることが示されています。 GM-CSF とインターロイキン 4 を融合することによって操作された新規サイトカイン GIFT4 は、B 細胞の増殖とエフェクター機能をシミュレートすることが以前に発見されました。 本明細書において、ＧＩＦＴ４の膜アンカー型は、糖脂質（ＧＰＩ）アンカー配列を融合することによって構築され、分子アジュバントとしてＥｎｖ豊富なＨＩＶウイルス様粒子（ＶＬＰ）に組み込まれた。 筋肉内初回免疫－鼻腔内追加免疫経路を通じて、得られたＨＩＶ ＶＬＰでモルモットを免疫した。 GIFT4 を含む VLP は、選択された株のパネルに対する結合力が大幅に増加し、中和範囲と効力が向上し、さらにいくつかの粘膜部位での IgG および IgA レベルが高くなり、より高いレベルの全身性抗体反応を誘導しました。 したがって、新規の GPI-GIFT4 含有 VLP は、予防的 HIV ワクチンとして開発される可能性があります。 GPI アンカー型 GIFT4 を分子アジュバントとして VLP に組み込むことは、免疫原性を高めるための新しいアプローチとなります。

ヒト免疫不全ウイルス (HIV) 感染の病因と結果を理解するための 30 年間の努力にもかかわらず、私たちは依然として、3,400 万人が HIV-1 とともに生きており、毎年約 200 万人が新たに感染し、160 万人が死亡しているという恐ろしい事実に直面しています1。 、2、3。 抗レトロウイルス併用療法 (ART) は、HIV 感染を減少させ、寿命を延ばす上で驚くべき成功を収めています。 しかし、ART 治療は免疫の健康を完全に回復するわけではなく、多くの炎症関連合併症や免疫不全合併症が生涯続く可能性があります4。 発展途上国の感染者の大多数は抗ウイルス薬を利用できません。 予防ワクチンは、HIV 関連の課題や問題を解決するための最優先事項であり続けます。

HIV ワクチン開発の最近の取り組みは、広範な中和抗体および T 細胞応答を誘発することに焦点を当てています。 しかし、HIV および SIV の病因研究の進歩により、粘膜侵入口における感染の初期段階がウイルス感染のボトルネックであることが実証され、この段階で潜在的なウイルスの脆弱性が特定されました 5,6。 感染細胞の創始者集団が自己増殖感染を確立するのに十分に拡大しない場合、ウイルスは排除される危険があります7。 SIV 粘膜伝播研究で明らかになり、HIV 伝播で推測される創始者集団が少ないことを考慮すると、この段階はワクチン媒介疾患予防の最大の機会を提供します。 HIV 感染症のほとんどは性行為によって感染します8。 HIV は免疫細胞を宿主として直接使用し、プロウイルス DNA を標的細胞のゲノムに組み込むため、ウイルス量を制限するように設計されたワクチンよりも粘膜ワクチンの方が播種感染を完全に防ぐ可能性が高くなります8。

多くの研究は、免疫応答を強化するための効果的なアジュバントとしてのサイトカインの有望な役割を示唆しています9、10、11、12。 アカゲザルでは、GM-CSFとワクチン抗原を共発現させる異種プライムブーストワクチンレジメンにより、アジュバント非投与群と比較してSIV感染に対するより良い防御が得られた。 これは、アジュバント治療群で誘発された Env 特異的 IgG 抗体の結合力の上昇とよく相関していました 13,14。 GM-CSF は、抗原提示細胞、特に骨髄系樹状細胞を動員して成熟を刺激することにより、抗体結合力を強化する可能性があることが示唆されました 13,14。 GM-CSF と IL-4 は一緒に、単球の樹状細胞への分化を誘導することが示されています 15、16、17。 IL-4 は、前駆体 T ヘルパー細胞の Th2 系統への分化の制御において極めて重要な役割を果たし、したがって体液性免疫応答を促進することが示されています 18。

我々のこれまでの研究では、遺伝子組み換えされた Env タンパク質が大幅に改善された効率でウイルス様粒子 (VLP) に組み込まれることが実証されています 19。 組み込まれた Env タンパク質は、VLP に組み込まれたときに、その保存されたエピトープとおそらく天然の立体構造を保持します 19。 これらの発見に基づいて、膜アンカー型フラジェリンが構築され、アジュバントとして VLP に同時に組み込まれました。 結果として得られた HIV キメラ VLP (cVLP) は、中和抗体および粘膜応答の増強を誘発しました。このことは、全身免疫応答と粘膜免疫応答の両方を誘発するために、Env が豊富な VLP に同時に取り込まれたアジュバントの重要性をさらに示しています 3。 最近の研究では、GM-CSF と IL4 (GIFT4 と呼ばれる) からのフソーカイン (2 つのサイトカインの融合タンパク質) が、免疫前サイトカイン分泌プロファイルの変化と強力な B 細胞エフェクター機能によって現れる新しい B 細胞エフェクター機能を引き起こすことを発見しました。 -細胞分裂促進反応20。 本研究では、CD59糖脂質（グリコシルホスファチジルイノシトール、GPI）シグナル配列をGIFT4のC末端配列にインフレームで融合させることにより、膜結合型のGIFT4を生成し、膜に固定されたGIFT4をEnvが豊富なVLPに組み込んだ。 われわれは、高密度のEnvと膜結合型GIFT4の両方を保持するこれらのcVLPが、結合力と中和活性の強化に反映されるように、品質が向上し、高度に増強されたEnv特異的抗体応答を誘発することを発見した。 これらのデータは、cVLP が HIV 粘膜ワクチンとしてさらに開発される可能性があることを示しています。

GIFT4遺伝子の膜結合型の図を図1aに示します。 メリチンシグナルペプチド（SP）およびCD59 GPIアンカーシグナルコード配列を、GPI-GIFT421の膜挿入を容易にするために、GIFT4コード配列の5'および3'末端にインフレームで融合させた。 抗GM-CSF抗体を使用したウェスタンブロット（図1b）では、GPI-GIFT4遺伝子を発現する組換えバキュロウイルス（rBV）に感染したsf9細胞の溶解物中の37 kDaで移動するバンドが検出されました（図1bのレーン1）。 GPI アンカー GIFT4 の予想サイズに合わせます。 発現したGPI-GIFT4の膜アンカーリングは、抗GM-CSF抗体、続いてPE結合二次抗体による細胞表面染色後のrBV感染細胞のFACS分析によって測定された蛍光強度の増強によってさらに実証されました（図1c） ）。

GIFT4 の GPI アンカー型と昆虫細胞の発現の図。

a、GPI-GIFT4コード遺伝子の概略図。 メリチンSPおよびマウスCD59-GPIアンカーのコード配列を、GIFT4をコードするDNAの5'末端および3'末端にそれぞれ融合させて、全長遺伝子を形成した。 b、GPI-GIFT4細胞発現。 ウェスタンブロットは抗GM-CSF抗体を用いて開発されました。 レーン 1、GPI-GIFT4 発現 rBV 感染昆虫細胞サンプルの全細胞溶解物。 レーン 2、精製 GM-CSF タンパク質。 レーン 3、対照としての HIV Env 発現 rBV 感染細胞の全細胞溶解物。 c、rBV感染昆虫細胞サンプルにおけるGPI-GIFT4細胞表面発現のFACS分析。 赤、アイソタイプ抗体コントロール。 青、コントロール細胞 + 抗 GMCSF 抗体。 緑色、GPI-GIFT4 発現細胞 + 抗 GMCSF 抗体。

VLP は、昆虫細胞の rBV 発現システムを使用して生成されました。 得られた VLP のタンパク質組成は、Gag、Env、または GM-CSF に特異的な抗体を使用したウェスタンブロットによって特徴付けられました。 図2a（a.2）に示すように、標準Env/Gag VLP（sVLP、レーン2）またはcVLP（レーン4）に組み込まれたEnvは、約120 kDa19の分子量を有することが観察されました。 GPI-GIFT4 の予想サイズで移動するバンドが cVLP および GIFT4/Gag VLP で見られ (a.3 のレーン 3 および 4)、これらの VLP への GPI-GIFT4 の組み込みを示しています。 図２ａのａ．２およびａ．３の両方のレーン４に示された結果は、膜アンカー型ＧＩＦＴ４およびＥｎｖがＨＩＶ ｃＶＬＰに共組み込まれ得ることをさらに示している。 GIFT4 の VLP への組み込みが膜表面上の GPI アンカーリングを介して行われていることを検証するために、FACS アッセイを実施しました。 ＧＩＦＴ４は、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体染色後のｃＶＬＰ（図２ｂの緑の曲線）における蛍光強度の増強によって検出されたが、ｓＶＬＰ（図２ｂの青の曲線）では検出されなかった。 さらに、cVLPからのGIFT4シグナルは、図2b（赤い曲線）に示すように、膜からGPIアンカー分子を放出するホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼであるPIPLCでの処理によって完全に除去された22。 これらのデータを総合すると、GPI アンカリングを通じて GIFT4 を VLP に組み込むことも、cVLP に同時に組み込むこともできることが実証されました。

VLP の特性評価。

a、VLP のタンパク質成分のウェスタンブロット分析。 総タンパク質 1 μg を含む VLP サンプルを SDS-PAGE にロードし、その後ウェスタンブロッティングを行いました。 タンパク質バンドは以下を使用してプローブされました。 a.1、抗 HIV Gag 抗体。 a.2、抗gp120ポリクローナル抗体。 a.3、抗GM-CSF抗体。 レーン 1、ギャグのみの VLP。 レーン 2、sVLP。 レーン 3、GIFT4/Gag VLP。 レーン 4、cVLP。 M、分子量 (kDs)。 b、抗GM-CSF抗体を使用した、VLPへのGIFT4 GPIアンカーリングのFACS分析。 図 1 の細胞表面染色で説明したように、VLP サンプル (1 mg/ml で 1 ml) を抗体染色に使用しました。青色、sVLP。 緑、cVLP。 赤、PIPLC 処理後の cVLP。 c、VLPまたはGIFT4によって刺激されたインビトロでのモルモット脾細胞の増殖。 モルモットから単離した脾臓細胞を、1 μg/ml のさまざまな HIV VLP または可溶性 GIFT4 (50 ng/ml) の存在下で in vitro で 2 日間培養し、EVOS 顕微鏡で写真撮影しました。 C.1からc.5、それぞれPBS、可溶性GIFT4、sVLP、GIFT4/Gag VLP、またはcVLPで処理された細胞。 スケールバー、1000μm。

VLPに組み込まれたGPI-GIFT4が依然として機能活性を保持しているかどうかを調べるために、モルモット脾臓リンパ球の増殖を誘導するcVLPの効力をインビトロで試験した。 図2cに示すように、1μg/mlのcVLPまたはGIFT4/Gag VLPの存在下で2日間培養した後、有意に多数の脾臓細胞がより大きなコロニーサイズのコロニーに増殖しました（c.4およびc.5）。コントロール (c.1) または sVLP (c.3) と比較した場合、増殖は sVLP 処理細胞 (c.3) でも観察されましたが、VLP を含む GIFT4 と比較するとレベルは低かった (c.3)。図 2c) の .4 および c.5) は、VLP 自体もリンパ球刺激因子であることを示しています。 これらの結果は、VLP に組み込まれた GPI-GIFT4 が、リンパ球増殖の刺激における可溶性 GIFT4 の生物学的活性を保持していることを示しています 20。

HIV VLPに組み込まれたGIFT4がEnv免疫原に対する抗体反応を増強するかどうかを調べるために、モルモットのグループをsVLP、cVLP、GIFT4/Gag VLP、またはGagのみVLPを用いた1回の筋肉内（im）初回刺激に続いて2回の鼻内（in）追加免疫で免疫しました。 、 それぞれ。 各免疫化の２週間後のＨＩＶ Ｅｎｖに特異的な免疫血清ＩｇＧレベルをＥＬＩＳＡによって評価した。 図３ａに示される結果（終点力価として示される）は、ｃＶＬＰが、ｓＶＬＰで観察されたものよりも高い力価で血清抗体応答を誘導したことを実証する（Ｐ＜０．０５）。 3回の免疫化後（10週目に3回出血、図3a）、cVLPで免疫化したモルモットは、sVLPによって誘導されたものよりも5倍高いIgGレベルを示しました（平均24600対4666、P <0.01）。 これらの結果は、膜アンカー型GIFT4のVLPへの同時取り込みが抗Env免疫応答の増強に非常に効果的であることを示した。 cVLP は IgG 応答の上昇を誘導しましたが、免疫血清中の Env 特異的 IgA は検出されませんでした。

血清 IgG および IgG サブタイプのエンドポイント力価。

モルモットを、それぞれ０週目、４週目、８週目に、ＧａｇのみＶＬＰ、ＧＩＦＴ４／Ｇａｇ ＶＬＰ、ｓＶＬＰ、またはｃＶＬＰで１回の初回刺激、２回のブースティングルートで免疫化し、免疫血清を各免疫の２週間後に採取した。 、6、10それぞれ。 a、血清IgGエンドポイント力価； b、3回目の採血（10週目）からの免疫血清のIgG1力価。 c、出血3からの免疫血清のIgG2エンドポイント力価。材料と方法に記載されているようにアッセイを実施した。 結果は平均値 ± 標準偏差として表されます。 統計分析にはスチューデント t 検定を使用しました。 分析は、Windows 用 GraphPad Prism バージョン 5.00 (カリフォルニア州サンディエゴ) を使用して行われました。 0.05 未満の P 値 (P < 0.05) は統計的に有意であるとみなされました。 *P < 0.05; **P < 0.01。

我々は、出血 3 血清中の血清 IgG サブクラス プロファイルを評価し、sVLP と cVLP が IgG1 と IgG2 の両方の免疫応答を誘導することを観察しました。 sVLPグループのIgG2/IgG1比は約9であり、cVLPグループのIgG2/IgG1比は約7である(図3bおよびc)。 これらのデータに基づいて、我々は、IgG2 が HIV VLP に対する IgG 応答を支配していると結論付けました。 IgG1 および G2 と比較すると、G3 ははるかに低いですが、市販の抗 IgG3 抗体がないため、この研究では IgG3 は測定されませんでした。 G1、G2、G3、G4 などのヒト IgG サブタイプとは異なり、モルモットにはサブタイプ IgG4 がありません。 cVLP は sVLP と比較してより高い IgG 力価を誘導しましたが、それらの抗体応答は同様の IgG サブタイプ プロファイルを示しました。

使用したGIFT4の配列はマウス由来のものである20。 したがって、我々は、GIFT4 に特異的な抗体応答がモルモットで誘導されるかどうか、またこれらの抗体がその後の免疫化において GIFT4 のアジュバント機能を低下させるかどうかを知りたいと考えました。 しかし、免疫血清中に GIFT4 特異的抗体は観察されませんでした (データは示されていません)。

粘膜免疫が HIV-1 の初感染を制御するために不可欠であることは十分に確立されています。 本研究では、粘膜免疫応答の増強が期待される、免疫療法を 1 回に 2 回の追加免疫で補充するという免疫レジメンを採用しました。 この免疫レジメンによってcVLPが粘膜免疫応答の増強を誘導するかどうかを判断するために、3回の免疫後の唾液および膣洗浄液中の分泌型Env特異的IgAおよびIgGレベルを評価しました。 図4a、bに示すように、唾液サンプル中のEnv特異的IgG力価とIgA力価は両方とも、sVLPグループよりもcVLPグループの方がはるかに高いことがわかりました。 注目すべきことに、10週目に、cVLPで免疫したモルモットは、sVLPで免疫したモルモットで誘導されたものよりも、膣洗浄液中で約5倍高いIgGレベル（図4c）および6倍高いIgAレベル（図4d）を示しました。これは、GIFT4 が粘膜免疫応答を誘発するための効果的なアジュバントであることを示しています。

粘膜抗体エンドポイント力価。

粘膜サンプルは、最後の追加免疫の4週間後である12週目に収集されました。 Env 特異的 IgG および IgA エンドポイント力価は、「材料と方法」に記載されているように ELISA によって検出されました。 a、唾液IgG。 b、唾液IgA。 c、膣IgG。 d、膣IgA。 データは平均値±標準偏差として表されました。 *P < 0.05; **P < 0.01。

HIV 抗原に対する抗体結合力は、感染の初期段階では低く、感染が進行するにつれて抗体が成熟するにつれて増加します 23。 結合力が増加した中和抗体は、成熟中に進化します。 繰り返し抗原に曝露すると、結合力の大幅な増加が報告されています24。 いくつかの最近の研究でも、非中和抗体の結合力と HIV 防御効果との相関関係が示されています 25、26、27。 したがって、抗体結合力分析は、保護を提供するための抗体の品質を評価する効果的な方法です。 cVLP が Env に対する結合力を高めた抗体応答を誘導するかどうかを判断するために、クレード B とクレード C の両方からの 6 つの Env シュードタイプウイルスを比較しました。 ビリオンの場合と同様に、Env は偽ウイルスのエンベロープに挿入されるため、偽ウイルスとビリオンの Env は機能的に同等であり、標的細胞に結合し、ウイルスと宿主の細胞膜融合を媒介します。 偽型ウイルスベースの中和アッセイは、HIV 感染をブロックする抗体の能力を評価するために広く使用されています。 したがって、シュードウイルス Env に対する抗体の結合力は、HIV 粒子への抗体の結合を反映するはずです。 図５に示される結果は、ｃＶＬＰグループの血清抗体が、ｓＶＬＰ免疫化グループからの血清と比較して、有意に増加した結合力を示すことを実証した。 図5に示すように、cVLPは、6つのクレードBウイルスのうち4つ（図5a）および6つのクレードCウイルスのうち4つ（図5b）への結合について、約40のAIとの結合活性が増加した抗体を誘発しました。 AI が 20 以下の sVLP (P < 0.05)。 クレード B の 6535.3 株およびクレード C の ZM214M.PL15 では、中間レベルの結合力増強が見られましたが、クレード B の AC10.0.29 または ZM109F.PB4 (クレード C) では変化は観察されませんでした (P > 0.05)。 興味深いことに、上記で観察されたように、cVLP は sVLP に対する結合力の増加を誘発しましたが、これらの株間の Env に対する結合力には大きな違いはありませんでした。 粘膜サンプル中の抗体レベルがはるかに低いため、血清 IgA の場合のように、粘膜サンプル中の IgG と IgA の両方の結合力は検出できませんでした。

選択されたシュードウイルスに対する免疫血清 IgG の結合力。

結合活性アッセイは、sVLPおよびcVLPで免疫化したモルモットからの3回目の採血(10週目)の免疫血清を用いて実施した。 a、クレードBシュードウイルスに対する免疫血清IgGの結合力指数。 b、クレードCシュードウイルスに対する免疫血清IgGの結合力指数。 データは平均値 ± 標準偏差として表されます。 *P < 0.05。

中和抗体は、機能的 Env にしっかりと結合し、侵入阻害、ウイルス凝集、補体依存性不活化を媒介したり、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性 / ウイルス阻害 (ADCC/ADCVI) を引き起こしたりすることにより、ウイルス感染を直接ブロックできます 28、29、30。したがって、ワクチンによって誘発される理想的な標的となります。 我々の結果は、GPIアンカーGIFT4を含むHIV cVLPがsVLPと比較してより高い力価のIgGを誘導したことを実証している。 さらに、HIVクレードBおよびCのEnvシュードウイルスのパネル（図5で抗体結合力を比較するために使用したものと同じウイルスパネル）を使用して、これらの抗体の中和反応性を調査しました。図6aに示すように、血清中和反応性が誘発されました。 cVLP グループは、中和に対して強い耐性を示す第 3 層ウイルスである PVO.4 および RHPA4259.7 (第 2 層) に対する cVLP グループによって強化されました (ウイルスの約 30% ～ 40% が 20 未満に中和されました、P < 0.05)。 sVLP グループとの比較。 試験した6つのクレードCウイルスのうち、cVLPグループの免疫血清は、sVLPグループと比較して、Du156.12（階層2）、ZM214M.PL15（階層2）、およびZM109F.PB4（中間）に対する中和の強化を示しました（P < 0.05）。 (図6b)。 GIFT4 を含む VLP および sVLP グループは、他のウイルスと同様の中和力価を示しました (P > 0.05)。 これらの結果はさらに、中和の幅と効力が強化された抗体応答の誘導における、cVLP の膜アンカー型 GIFT4 のアジュバント効果を示しています。

中和活動。

sVLPおよびcVLP免疫化動物からの出血3の免疫血清を中和活性について試験した。 免疫血清の最終希釈倍率は 40 倍でした。 a、クレードBシュードウイルスに対する中和。 b、クレードCシュードウイルスに対する中和。 データは平均値±標準偏差として表されました。 *P < 0.05。

HIV に対するワクチンの主な目的は、粘膜表面のレベルで免疫応答を誘発して感染を阻止することと、全身の区画で播種されたウイルスを除去することです。 全身経路で投与されたワクチンは、一般に強い粘膜免疫反応を刺激できません。 本研究では、HIV Env と共刺激因子としての新規フソーカイン GIFT4 を同じ粒子内に効率的に組み込む cVLP を開発しました。 得られた cVLP は、全身性コンパートメントおよび粘膜表面で増強された抗体応答を誘発する能力について評価されました。 この研究では、HIV 免疫応答を強化するためのいくつかのアプローチが統合されています。 これらには以下が含まれる: 1) 免疫原の密度を増加させるための VLP への Env の組み込みの強化。 ２）Ｂリンパ球の増殖および活性化を刺激することによって免疫原性をさらに改善するための、膜結合型のＧＩＦＴ４の構築およびｃＶＬＰへの同時組み込み。 ３）全身免疫応答および粘膜免疫応答を誘導するための全身プライム／粘膜ブースト経路の採用。 現在の結果に基づいて、この統合 HIV ワクチン戦略は、将来、予防的 HIV ワクチンを製造するためにさらに開発される可能性があります。

現在のワクチンのほとんどは筋肉内注射によって投与され、全身の免疫反応を誘導します。 しかし、粘膜免疫は全身免疫によって誘導されることはほとんどありません。 粘膜感染は HIV 感染の主な経路であり、世界中でエイズ発生率の 80% もの高さを占めている 32 ため、粘膜の侵入口で機能する免疫は HIV-1 の初感染を防ぐために非常に重要です。 粘膜表面での HIV 感染の効率は比較的低いため、抗体媒介の粘膜防御免疫応答のわずかな増強でも、疾患の発生率の低下に重大な効果をもたらす可能性があります 7。 したがって、効果的な HIV ワクチンは、初期感染の頻度を減らし、場合によっては生殖器や腸の粘膜から全身リンパ器官へのウイルスの漏出を阻止するための粘膜免疫と、あらゆるウイルスを除去するための広範な中和抗体反応などの全身免疫の両方を誘導する必要がある可能性があります。蔓延したウイルス。 本研究では、全身性区画と粘膜表面の両方で免疫力の増強を誘導するために、筋肉内初回免疫－鼻腔内追加免疫経路を採用した。

これまでの研究では、B細胞、T細胞、血漿細胞、プロフェッショナル抗原提示細胞（APC）を含む胚中心の存在による、粘膜免疫反応と全身免疫反応の両方の誘導における鼻腔の重要性が示唆されています33。 また、気道および消化管の入口部位に戦略的に配置されたリンパ組織が抗原の取り込みにおいて重要であることも十分に確立されている。 新しく構築された cVLP による 2 回の追加免疫により、同じ経路で投与された sVLP と比較して、粘膜 HIV Env 特異的 IgG および IgA レベルの高度な上昇が誘導されました。 内腔に分泌される抗体は、粘膜への抗原の浸透を制限する免疫学的障壁を提供することが知られており、HIV-1 感染からの防御と強く関連しています 34,35,36。 cVLP で免疫した動物では強力な粘膜 IgA および IgG 応答が観察されましたが、血清 IgA は検出できませんでした。 IgG は免疫血清中で IgA よりも優勢であり、ELISA でのコーティング抗原の同じエピトープへの結合において IgA と競合する可能性があるため、IgA が検出されない場合は、この抗体が免疫血清中に存在しないか、力価が低いことを示している可能性があります。 RV144 試験における免疫相関関係の最近の分析では、血清 IgA レベルが HIV 防御と逆相関していることが判明しました 37。 したがって、免疫血清中の血清 IgA レベルが低いことは、GIFT4 含有 VLP 誘導免疫の有利な結果である可能性があります。

理想的な抗体応答には、高力価の抗体だけでなく、高い抗体結合力および中和活性も含まれるべきです 24、25、26、27。 我々は、cVLP免疫グループにおいて抗体結合力と中和幅および効力の増強を観察し、GPI-GIFT4のアジュバント効果により、免疫系がEnvに存在するB細胞エピトープをより効果的に処理または提示できるようにするという結論を裏付けた。 抗体結合力と中和の間の相関関係は明らかではありませんでしたが、観察された結合力の強化は非中和抗体によって寄与されている可能性があります。 他の最近の研究でも、非中和抗体の結合力と HIV 防御効果との相関関係が示されています 25、26、27。 他の異なるメカニズムもまた、ウイルスの侵入を防ぎ、逃走したウイルスの複製を阻止し、ウイルスの定着を遅らせるために、腸および直腸/膣粘膜組織を含む粘膜部位でのADCCおよびT細胞応答などの免疫の抗ウイルス機能に関与している可能性があります。全身感染38,39,40,41,42 。 GIFT4 の機能獲得活性が B 細胞応答を促進することが判明したため、この研究は主に抗体応答 (レベル、結合力、および中和力) に焦点を当てました 20。

GM-CSF は、多くの研究で HIV ワクチンの効果的なアジュバントであることが証明されています。 アカゲザルでは、GM-CSF DNA と Gag、Pol、および Env DNA の同時送達とそれに続く MVA ブーストによって、結合力が向上した抗 Env 抗体が誘発されました 13。 アジュバント添加群は、攻撃および再出現ウイルス感染のより良好な制御を示した13。 さらに、APC は強力な免疫応答を誘導するために重要です。 以前の研究では、GM-CSF を IL-4 と組み合わせると、インビトロでのヒト DC の増殖が最適化されることが示されています 17。 どちらのサイトカインも、成長していないヒト血液単球または増殖している骨髄由来の前駆体の分化と成熟を促進することが知られています43。 前述の研究と今回の研究で見られた免疫応答の増強の根底にあるメカニズムは、単球の分化と成熟の促進におけるGM-CSFとIL-4、あるいはGIFT4の機能獲得の役割と密接に関連している可能性がある。樹状細胞（DC）への移行16。 単一のサイトカインまたはその混合物とは異なり、遺伝子操作されたフソーカインは、以前に実証されたように、リンパ球の刺激因子として新たな機能を生み出すことができます20、44、45。 GIFT4 は、機能獲得活性を生成して強力な B 細胞増殖を誘導し、B 細胞応答の強化につながることが判明しました 20。 さらに GPI アンカーを結合させて GIFT4 を Env と一緒に VLP に組み込むことを可能にすることで、同じ cVLP に組み込まれた抗原刺激因子が標的免疫細胞を提供し、抗原提示と増殖を改善できる可能性があります。 VLP との混合と比較して、VLP への免疫刺激因子の同時組み込みによるアジュバントの有効性の向上も、以前に実証されています 46、47、48。 GIFT4 によって刺激された Env プライミング B 細胞集団の強力な増殖は、本研究における cVLP 免疫動物における抗体応答の増強にとって重要な要素である可能性があります。 さらに、GIFT4 はサイトカイン (GM-CSF および IL-4) 由来であるため、分子アジュバントとして使用した場合の安全性が高くなります。

この研究では、新規アジュバントとしての VLP における GPI アンカー型 GIFT4 の大きな価値は、結合力の増強と中和能力の拡大による全身および粘膜の抗体応答の改善によって裏付けられています。 これらのデータは、プライムイン追加免疫経路による投与のための有効なＨＩＶワクチンの開発におけるＧＩＦＴ４含有ＨＩＶ ＶＬＰの可能性を実証している。 膜アンカー型 GIFT4 の組み込みは、さまざまな VLP ワクチンの免疫原性を改善するための一般的なアプローチとなりえます。

この研究は、国立衛生研究所の実験動物の管理と使用に関するガイドの推奨事項に厳密に従って実施されました。 すべてのモルモットの研究は、エモリー大学施設内動物管理使用委員会 (IACUC) によって承認されました。 IACUC は、この研究に対してプロトコル番号 079-2008Y を発行しました。 メスのモルモット (生後 8 週間) を Jackson Laboratory から購入し、エモリー大学の動物施設に収容しました。 免疫化と採血は、塩酸ケタミンとキシラジンで誘発および維持された麻酔下で行われ、苦痛を最小限に抑えるためにあらゆる努力が払われました。

膜アンカー型GIFT4をコードする遺伝子を生成するために、ミツバチメリチンおよびマウスCD59 GPIアンカーからのシグナルペプチドのコード配列を、GIFT4コード遺伝子（マウス配列由来20）の5'末端および3'末端に融合させた。フレーム内で、PCR20、49、50、51をオーバーラップさせることにより、GPIアンカーGIFT4（GPI-GIFT4）の全長コード遺伝子を取得します。 次いで、得られたGPI-GIFT4コード遺伝子をトランスファーベクターpFastBac-1プラスミド(Invitrogen、カリフォルニア州カールズバッド)にクローン化した。 GPI-GIFT4 を発現する組換えバキュロウイルス (rBV) は、Bac-to-Bac 昆虫細胞タンパク質発現システム (Invitrogen、カリフォルニア州カールズバッド) を使用して生成されました。

GPIアンカー型GIFT4が膜方向に移行して細胞表面に発現できるかどうかを確認するために、GPI-GIFT4を発現するrBVをsf9細胞にMOI 2で感染させた。2日後、細胞を回収し、ラット抗マウスGMで染色した。 -CSF 抗体 (BD Biosciences) に続いて PE 結合二次抗体。 非GIFT4関連ラット抗マウス抗体は、抗体対照として機能した。 Envを発現するrBVに感染したSf9細胞を抗GM-CSFで染色し、続いて別の対照としてPE結合二次抗体で染色した。 蛍光強度を記録し、BD FACSCanto II フローサイトメーターを使用した FACS によって分析しました。

4 つの異なる VLP (Gag のみ VLP、GIFT4/Gag VLP、sVLP、および cVLP) を、以前に記載されている昆虫細胞発現系を使用して比較のために生成しました 19。 cVLPの産生のために、sf9細胞を、VLPへの高レベルの取り込みを示す改変HIV Envコンセンサス（ConS）、GPI-GIFT4およびGagをそれぞれ発現する3つのrBVに6、2および3のMOIで同時感染させた。それぞれ3、19。 標準 VLP および Gag のみ VLP は、記載されているように生成されました19。 GIFT4/Gag VLPは、それぞれ2および3のMOIでGPI-GIFT4およびGagを発現するrBVをsf9細胞に同時感染させることによって産生された。 感染の 2 日後、培養上清を収集し、Quixstand ベンチトップ システム (GE Healthcare、スウェーデン、ウプサラ) を使用した多孔質繊維濾過によって VLP を濃縮し、その後前述のようにショ糖密度勾配超遠心分離を行いました 50。 精製された VLP の収量を定量するために、Bio-Rad タンパク質アッセイ (Bio-Rad Laboratories, Inc、Hercules、CA) を使用して各サンプルのタンパク質濃度を推定しました。

cVLP中のアンカーGIFT4が可溶性GIFT4の生物学的活性を保持しているかどうかを調べるために、cVLPがインビトロでモルモット脾臓細胞の増殖を誘導できるかどうかを試験した。 脾臓細胞を、それぞれ1μg/mlのsVLP、cVLP、またはGIFT4/Gag VLPの存在下で完全RPMI培地中で培養した。 可溶性GIFT4 (50 ng/ml)を陽性対照として使用した。 5% CO2中、37℃で2日間インキュベートした後、EVOS顕微鏡(Life Technologies、ニューヨーク州グランドアイランド)で細胞の増殖を観察し、画像化しました。

メスのハートレー系モルモットを Charles River Laboratory (マサチューセッツ州ウィルミントン) から入手し、4 つのグループ (1 グループあたり 5 匹) に分けました。 群は、４週間間隔でＶＬＰワクチンによる１回の筋肉内（ｉ．ｍ．）初回刺激とそれに続く２回の鼻腔内（ｉｎ）追加免疫を含む免疫レジメンで免疫した。 各免疫化では、Gag のみグループおよび GIFT4/Gag VLP グループの動物をそれぞれ 100 μg の総タンパク質で免疫化しました。 標準および cVLP は、それぞれ 10 μg Env を含む用量を使用して投与されました。 平均として、ＧＩＦＴ４含有ＶＬＰ（ｃＶＬＰおよびＧＩＦＴ４／Ｇａｇ ＶＬＰ）の１用量には、可溶性ＧＩＦＴ４を使用して校正した約２μｇのＧＩＦＴ４が含まれていた。 各免疫の２週間後、麻酔をかけたモルモットの大静脈出血により免疫血清を採取した。

粘膜サンプルは、最後の追加免疫の4週間後である12週目に収集されました。 膣洗浄液は、経口栄養針（Braintree Scientific Inc.、ブレインツリー、マサチューセッツ州）を用いて膣内に 250 μl の PBS を洗浄することによって収集されました 52。 唾液サンプルを収集するために、あらかじめ重さを量った医療用綿綿棒を口に挿入し、5分間放置した後、重さを量り、0.02% Tween 20を加えたPBSで抽出しました。サンプルを簡単に遠心分離し、上清を0.22 μmフィルターでろ過しました。さらに分析するために -80 °C で保存しました。

HIV Env 特異的 IgG、IgG1、IgG2、および IgA 抗体反応を測定するために、ELISA プレート (Nunc-Immuno Plate MaxiSorp™、Nunc Life Technologies、バーゼル、スイス) を、組換えワクシニア ウイルスに感染した 293T 細胞から精製した ConS Env gp120 でコーティングしました 3。 19. 希釈時にナイーブサンプルの２倍のＯＤ ４５０ を与える最高の希釈率を、抗体終点力価として指定した。

それぞれクレード B および C の NIH 標準参照パネルから 6 つの env 発現プラスミドを選択し、結合力および中和アッセイ用の Env シュードタイプ ウイルスを生成しました。 これらの Tier 2/3 ウイルスには、クレード B の 6535.3、PVO.4、AC10.0.29、TRJO4551.58、RHPA4259.7、CAAN5342.A2、および Du156.12、Du422.1、ZM214M.PL15、ZM249M.PL1、ZM109F が含まれます。クレード C53、54 の PB4 および CAP45.2.00.G3。

シュードウイルスは、293T 細胞 (T-75 細胞培養フラスコ内の 15 ml 増殖培地に 6 ～ 8 × 106 細胞) に、10 μg の特定の env 発現プラスミドおよび 10 μg の env 欠損 HIV-1 バックボーン ベクターをトランスフェクトすることによって調製されました。 (pSG3△Env) リポフェクタミン 2000 (invitrogen) を使用。 培養上清に含まれるシュードウイルスをトランスフェクションの 2 日後に回収し、0.45 μm フィルターで濾過しました。 各シュードウイルスの 50% 組織培養感染量 (TCID50) を測定し、さらなる分析のためにサンプルを -80 °C で保存しました。

中和アッセイは、以前に記載されているように、若干の変更を加えて JC53-BL 細胞で実行されました 3。 簡単に説明すると、JC53-BL 細胞を感染の 24 時間前に 96 ウェル プレートにウェルあたり 25,000 細胞で播種しました。 モルモット血清サンプルを 56 °C で 30 分間加熱不活化し、10% FCS-DMEM で最終容量 25 μl になるまで 1:20 に希釈し、50% を含む 10% FCS-DMEM で希釈したシュードウイルスストック 25 μl に加えました。感染性粒子（最終血清希釈、1:40）。 培地のみと混合したウイルスを対照として使用した。 ウイルス-免疫血清混合物を37℃で1時間インキュベートし、その後、最終濃度15μl/mlのDEAE-デキストランとともにJC-53細胞に添加した。 2時間のインキュベーション後、さらに200μlの完全DMEMを添加した。 感染の 2 日後、Chackerian et al 55 の記載に従って培地を除去し、細胞を固定および染色しました。 抗体中和活性は中和のパーセンテージとして表され、[(対照ウェル内の青色焦点の平均数 - ウイルス-血清混合物サンプルウェル内の青色焦点の平均数)/(対照ウェル内の青色焦点の平均数)]×100として計算されます。 %。

96ウェルマイクロタイタープレートを、コーティング緩衝液（0.1M炭酸ナトリウム、pH9.5）中のEnv-シュードビリオン（4μg/ml）100μlで4℃で一晩コーティングし、希釈した血清サンプルをウェルに添加し、1.5分間インキュベートした。 37℃で1時間。 このアッセイは、免疫血清の結合後の抗体と抗原の間の弱い結合と高親和性結合を区別するために、1.5 M チオシアン酸ナトリウム (NaSCN) で 15 分間処理した、または処理しない免疫血清の並行滴定を使用して実施されました。 続いて、標準的なELISA手順を使用して抗体力価を測定した。 結合力指数（ＡＩ）は、ＮａＳＣＮ処理を行った場合の力価をＮａＳＣＮ処理を行わない場合の力価で割り、１００５６、５７を掛けることによって計算した。

この記事を引用する方法: Feng, H. et al. GPI アンカー型改変サイトカインを分子アジュバントとして組み込むと、HIV VLP の免疫原性が強化されます。 科学。 議員 5、11856; 土井: 10.1038/srep11856 (2015)。

Barre-Sinoussi、F. et al. 後天性免疫不全症候群（AIDS）のリスクがある患者からのTリンパ向性レトロウイルスの分離。 サイエンス 220、868–871 (1983)。

記事 ADS CAS Google Scholar

コフ、WCら。 安全で効果的な HIV ワクチンの開発を加速する: ワクチンの 10 年における HIV ワクチンのケーススタディ。 ワクチン 31 補足 2、B204–208 (2013)。

記事 Google Scholar

ヴァシリエバ、EV 他膜固定アジュバントを含む HIV ウイルス様粒子に対する粘膜免疫応答の強化。 mBio 2、e00328–00310 (2011)。

記事 Google Scholar

Steven, G. & Deeks、SRLADVH エイズ終焉: 慢性疾患としての HIV 感染。 ランセット 2、1525 (2013)。

Google スカラー

Haase、AT HIV および SIV の性感染における初期の出来事と介入の機会。 Annual review of Medicine 62, 127–139 (2011)。

記事 CAS Google Scholar

Haase, AT HIV-1 粘膜感染を防ぐために初期感染を標的にします。 ネイチャー 464、217–223 (2010)。

記事 ADS CAS Google Scholar

Haase, AT HIV、SIV、およびそれらの宿主の粘膜最前線における危険。 自然のレビュー。 免疫学 5、783–792 (2005)。

記事 ADS CAS Google Scholar

クラネージ、MP 他。 三量体 HIV-1 クレード C gp140 を繰り返し膣内投与すると、血清および粘膜の抗体反応が誘導されます。 粘膜免疫学 3、57–68 (2010)。

記事 CAS Google Scholar

Xu、R.ら。 HIV プラスミド DNA ワクチンの活性をアジュバント化するさまざまなプラスミドベースのサイトカインおよびケモカインの能力の比較。 ワクチン 26、4819–4829 (2008)。

記事 CAS Google Scholar

カラロタ、SA et al. 局所 HIV-1 DermaVir ワクチンのメモリー T 細胞アジュバントとしての IL-15。 ワクチン 26、5188–5195 (2008)。

記事 CAS Google Scholar

カスタルデッロ、A. et al. インターフェロン調節因子-1 は、tat DNA ベースのワクチン接種において強力なアジュバントとして機能します。 細胞生理学ジャーナル 224、702–709 (2010)。

記事 CAS Google Scholar

カナガベル、SK et al。 可溶性多量体 TNF スーパーファミリー リガンド アジュバントは、HIV-1 Gag DNA ワクチンに対する免疫応答を強化します。 ワクチン 30、691–702 (2012)。

記事 CAS Google Scholar

ロビンソン、HLら。 DNA/MVA免疫不全ウイルスワクチンによって誘発されるAbを中和するためのアジュバントとしてのGM-CSF DNAに関する研究。 ウイルス学 352、285–294 (2006)。

記事 CAS Google Scholar

ライ、L.ら。 顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子共発現DNA/改変ワクシニアアンカラサル免疫不全ウイルスワクチンによる感染予防。 感染症ジャーナル 204、164–173 (2011)。

記事 CAS Google Scholar

Gluckman, JCCB、Chapuis, F. & Rosenzwajg, M. ヒト樹状細胞のインビトロ生成と細胞療法。 サイトカイン Cell Mol Ther. 3、187–196 (1997)。

CAS PubMed Google Scholar

ハーカス、TR et al. 顆粒球マクロファージコロニー刺激因子受容体：その構造と細胞シグナル伝達および疾患における役割との関連性。 Blood 114、1289–1298 (2009)。

記事 CAS Google Scholar

ロジャース、W.O. et al. 異種DNA初回刺激およびポックスウイルス追加免疫レジメンによる致死性マラリア原虫マラリアに対するアカゲザルの保護。 感染と免疫 70、4329–4335 (2002)。

記事 CAS Google Scholar

Romagnani, S. ヒト TH1 および TH2 細胞の生物学。 臨床免疫学ジャーナル 15、121–129 (1995)。

記事 CAS Google Scholar

ワン、BZら。 高レベルのキメラヒト免疫不全ウイルスエンベロープ糖タンパク質をウイルス様粒子に組み込む。 ジャーナル オブ ウイルス学 81、10869–10878 (2007)。

記事 CAS Google Scholar

Deng, J. et al. 改変フソーカイン GIFT4 は、B 細胞が殺腫瘍性 T 細胞応答を引き起こす能力をライセンスします。 がん研究 74、4133–4144 (2014)。

記事 CAS Google Scholar

Civenni, G.、Test, ST、Brodbeck, U. & Butikofer, P. GPI アンカータンパク質のヒト赤血球へのインビトロ取り込みと膜におけるそれらの運命。 Blood 91、1784–1792 (1998)。

CAS PubMed Google Scholar

Nagarajan, S. & Selvaraj, P. 腫瘍細胞表面に発現される糖脂質アンカー型 IL-12 は、抗腫瘍免疫応答を誘導します。 がん研究 62、2869–2874 (2002)。

CAS PubMed Google Scholar

Suligoi, B. et al. 抗 HIV 抗体の結合力指数: 第 3 世代と第 4 世代の自動イムノアッセイ間の比較。 臨床微生物学ジャーナル 49、2610–2613 (2011)。

記事 CAS Google Scholar

サンドリング、C.ら。 アジュバント中の可溶性 HIV-1 Env 三量体は、霊長類において強力かつ多様な機能的 B 細胞応答を誘発します。 実験医学ジャーナル 207、2003–2017 (2010)。

記事 CAS Google Scholar

Xiao、P.ら。 複数のワクチンによって誘発される非中和抗エンベロープ抗体活性は、アカゲザルにおけるサル/ヒト免疫不全ウイルスSHIV89.6P攻撃後の急性および慢性ウイルス血症の両方を軽減することにより、防御効果に貢献します。 ジャーナル オブ ウイルス学 84、7161–7173 (2010)。

記事 CAS Google Scholar

SWバーネットら。 アルファウイルスレプリコン粒子で免疫し、MF59アジュバント中の三量体エンベロープ糖タンパク質で追加免疫したマカクザルの粘膜サル-ヒト免疫不全ウイルス攻撃に対する抗体媒介防御。 ジャーナル オブ ウイルス学 84、5975–5985 (2010)。

記事 CAS Google Scholar

Zhao、J.ら。 ヒト免疫不全ウイルス/AIDS ワクチンの前臨床研究: 抗 Env 抗体の結合力と攻撃後のピークウイルス血症の間の逆相関。 ジャーナル・オブ・ウイルス学、83、4102–4111 (2009)。

記事 CAS Google Scholar

Benjelloun, F.、Lawrence, P.、Verrier, B.、Genin, C. & Paul, S. 広範囲中和抗体の誘導におけるヒト免疫不全ウイルス 1 型エンベロープ構造の役割。 ジャーナル オブ ウイルス学 86、13152–13163 (2012)。

記事 CAS Google Scholar

Forthal, DN & Moog, C. Fc 受容体媒介抗ウイルス抗体。 HIV と AIDS 4、388–393 (2009) における現在の見解。

記事 Google Scholar

Huber, M. & Trkola, A. HIV-1 に対する体液性免疫: 中和とそれ以降。 Journal of Internal Medicine 262、5–25 (2007)。

記事 CAS Google Scholar

シーマン、MS 他中和抗体の評価のための HIV-1 Env シュードウイルスの多様なパネルの段階的分類。 ウイルス学ジャーナル 84、1439–1452 (2010)。

記事 CAS Google Scholar

Hedden, SL、Whitaker, D.、Floyd, L. & Latimer, WW 南アフリカの薬物使用者における HIV の罹患率と行動危険因子における性差。 エイズと行動 13、288–296 (2009)。

記事 Google Scholar

Boyaka, PN & McGhee, JR 粘膜免疫誘導のためのアジュバントとしてのサイトカイン。 Advanced Drug Delivery Reviews 51、71–79 (2001)。

記事 CAS Google Scholar

Alfsen, A.、Iniguez, P.、Bouguyon, E. & Bomsel, M. gp41 エンベロープ糖タンパク質上の保存されたエピトープに特異的な分泌型 IgA は、HIV-1 の上皮トランスサイトーシスを阻害します。 免疫学ジャーナル 166、6257–6265 (2001)。

記事 CAS Google Scholar

Lo Caputo、S. 他 HIV-1 に曝露されているが感染していない異性愛者の男性における粘膜および全身の HIV-1 特異的免疫。 Aids 17、531–539 (2003)。

記事 Google Scholar

Devito、C. et al. HIV-1 に曝露され、血清反応が持続的に陰性である被験者の粘膜および全身コンパートメントにおける分岐群間 HIV-1 特異的中和 IgA。 後天性免疫不全症候群ジャーナル 30、413–420 (2002)。

記事 CAS Google Scholar

ヘインズ、BFら。 HIV-1 ワクチンの有効性試験の免疫相関分析。 ニューイングランド医学ジャーナル 366、1275–1286 (2012)。

記事 CAS Google Scholar

Kozlowski, PA & Neutra, MR HIV 感染予防における粘膜免疫の役割。 現在の分子医学 3、217–228 (2003)。

記事 CAS Google Scholar

Ahlers, JD & Belyakov, IM 粘膜 HIV ワクチンの標的化と送達を最適化するための戦略。 Eur J Immunol 39、2657–2669 (2009)。

記事 CAS Google Scholar

ヘッセル、AJ et al. マカクザルにおける低用量の反復粘膜SHIV攻撃に対する効果的な低力価抗体防御。 Nature Medicine 15、951–954 (2009)。

記事 CAS Google Scholar

Pantaleo、G. et al. 長期非進行性ヒト免疫不全ウイルス感染症を患う被験者を対象とした研究。 ニューイングランド医学ジャーナル 332、209–216 (1995)。

記事 CAS Google Scholar

ローゼンバーグ、ES et al. ウイルス血症の制御に関連する活発な HIV-1 特異的 CD4+ T 細胞応答。 サイエンス 278、1447–1450 (1997)。

記事 ADS CAS Google Scholar

Mellman, I. & Steinman, RM 樹状細胞: 特殊化された制御された抗原処理機械。 セル 106、255–258 (2001)。

記事 CAS Google Scholar

Deng, J. & Galipeau, J. 操作されたフソーカインによる B 細胞の調節細胞への再プログラミング。 感染症の薬物ターゲット 12、248–254 (2012)。

記事 CAS Google Scholar

Ng, S. & Galipeau, J. 簡潔な総説: 癌および自己免疫疾患における免疫細胞応答の調節のためのサイトカインの融合の操作。 幹細胞トランスレーショナル医学 4、66–73 (2015)。

記事 CAS Google Scholar

ワン、L.ら。 インフルエンザマトリックスタンパク質 2 の四量体外部ドメインとフラジェリンを含むウイルス様粒子は、マウスにおいて異種サブタイプ防御を誘導します。 BioMed Research International 2013、686549 (2013)。

PubMed PubMed Central Google Scholar

ワン、BZら。 膜アンカー型フラジェリンを組み込んだインフルエンザ VLP による鼻腔内免疫化は、強力な異種亜型防御を誘導します。 PloS one 5、e13972 (2010)。

記事 ADS CAS Google Scholar

ワン、BZら。 膜アンカー型フラジェリンをインフルエンザウイルス様粒子に組み込むと、免疫応答の幅が広がります。 ジャーナル オブ ウイルス学 82、11813–11823 (2008)。

記事 CAS Google Scholar

Nimal, S.、Heath, AW & Thomas, MS TNF α cDNA への融合による HIV gp120 DNA ワクチンに対する免疫応答の増強。 ワクチン 24、3298–3308 (2006)。

記事 CAS Google Scholar

Skountzou、I. et al. グリコシルホスファチジルイノシトールアンカー顆粒球マクロファージコロニー刺激因子または CD40 リガンドの組み込みにより、キメラサル免疫不全ウイルス様粒子の免疫原性が強化されます。 ジャーナル オブ ウイルス学 81、1083–1094 (2007)。

記事 CAS Google Scholar

Poloso, NJ、Nagarajan, S.、Mejia-Oneta, JM & Selvaraj, P. GM-CSF の GPI アンカーリングにより、活性な膜結合サイトカインが部分的に放出されます。 分子免疫学 38、803–816 (2002)。

記事 CAS Google Scholar

ベラスケス、LS 他。 in situ ゲル化乾燥粉末ワクチンに配合されたノーウォーク ウイルス様粒子の鼻腔内送達。 ワクチン 29、5221–5231 (2011)。

記事 CAS Google Scholar

Blutt、SE、Warfield、KL、O'Neal、CM、Estes、MK & Conner、ME ロタウイルスおよびウイルス様粒子 (VLP) によって誘導される防御効果を決定する宿主、ウイルスおよびワクチンの因子。 ワクチン 24、1170–1179 (2006)。

記事 CAS Google Scholar

アントニス、AF 他。 ブタパルボウイルス誘発性生殖不全を予防するための新規組換えウイルス様粒子ワクチン。 ワクチン 24、5481–5490 (2006)。

記事 CAS Google Scholar

カリフォルニア州ダーディンら。 gp41 の最初の 7 連反復を標的とする融合阻害剤に対するヒト免疫不全ウイルス 1 型の感受性には、gp41 の異なる領域が関与しており、共受容体との gp120 相互作用によって一貫して調節されます。 ジャーナル オブ ウイルス学 75、8605–8614 (2001)。

記事 CAS Google Scholar

ライ、L.ら。 GM-CSF DNA: より高い結合活性 IgG、直腸 IgA のアジュバントであり、DNA/MVA 免疫不全ウイルス ワクチンによる SHIV-89.6P 感染の急性期に対する防御を強化します。 ウイルス学 369、153–167 (2007)。

記事 CAS Google Scholar

バーモント州、CL et al. 一価髄膜炎菌 B 外膜小胞ワクチンによる免疫化後の抗体結合力と免疫グロブリン G アイソタイプ分布。 感染と免疫 70, 584–590 (2002)。

記事 CAS Google Scholar

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研究室のサポートについては、Ying-Chun Wang 氏、Tamanna Ahmed 氏、Dahnide Taylor Williams 氏、管理上のサポートについては Erin-Joi Collins 氏に感謝します。 この研究は、NIH/NIAID 助成金 AI10908 (RWC)、AI116361 (BZW)、AI093881 (JG)、Winship Robbins Scholar Award および Winship Melanoma Research Fund (JD) によって支援されました。

Feng Hao と Zhang Han も同様にこの研究に貢献しました。

微生物学および免疫学部、エモリー大学エモリーワクチンセンター、アトランタ、30322、ジョージア州、米国

Hao Feng、Han Zhang、Li Wang、Yuan He、Shelly Wang、Roheila Seyedtabaei、Richard W. Compans、Bao-Zhong Wang

エモリー大学ウィンシップがん研究所血液学・腫瘍内科、アトランタ、30322、GA、米国

ジュシェン・デン & ジャック・ガリポー

河南理工大学生物工学部、鄭州、450052、中国

チン・ワン & ライティン・リウ

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RWC と BZW がプロジェクトを管理しました。 HF、LL、BZW は免疫実験を設計しました。 HF、HZ、LW、YH、SW、RS は免疫実験を行いました。 JD と JG は機能分析を実行しました。 QW と LL は統計分析を実行しました。 HF、HZ、BZW が原稿を書きました。 JG、RWC、BZW は原稿を改訂しました。

著者らは、競合する経済的利害関係を宣言していません。

この作品は、クリエイティブ コモンズ表示 4.0 国際ライセンスに基づいてライセンスされています。 この記事内の画像またはその他のサードパーティ素材は、クレジットラインに別段の記載がない限り、記事のクリエイティブ コモンズ ライセンスに含まれています。 素材がクリエイティブ コモンズ ライセンスに含まれていない場合、ユーザーは素材を複製するためにライセンス所有者から許可を得る必要があります。 このライセンスのコピーを表示するには、http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ にアクセスしてください。

転載と許可

Feng、H.、Zhang、H.、Deng、J. 他。 GPI アンカー型改変サイトカインを分子アジュバントとして組み込むと、HIV VLP の免疫原性が強化されます。 Sci Rep 5、11856 (2015)。 https://doi.org/10.1038/srep11856

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受信日: 2014 年 10 月 20 日

受理日: 2015 年 5 月 22 日

公開日: 2015 年 7 月 7 日

DOI: https://doi.org/10.1038/srep11856

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